4.2   供检验样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不得开启，防 止样品被环境污染。

4.3   收到样品后，应该马上备案，撰写检验编号，并按检验规定尽早检验。如无法立即检验， 样品应放到棚温荫凉干躁处，不必冷冻或冷藏。

4.4   若仅有一个样品而与此同时需做多种分析，如病菌、毒理、化学等，则宜先取出一部分样品 做病菌检验，再将剩下样品做其他剖析。

4.5   在检验全过程中，从开启包装到所有检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散， 常用器皿及原材料均应事前灭菌，所有操作应在无菌棚里开展，或在对应情况下，按无菌操作 要求开展。

4.6   如检出粪大肠菌群或其他病原菌，自汇报传出之日起该菌苗及被检试品应储存一个月。

5   供检样品的制取

5.1   液态样品

5.1.1   水溶性的液体试品，可量取 10mL 加到 90mL 灭菌生理生理盐水中，如试品低于 10mL， 仍按 10 倍稀释法开展。若为 5mL 则加到 45mL 灭菌盐水，搅拌后，做成 1：10 检液。

5.1.2   油性液态试品，取样品 10mL，先放 5mL 灭菌液体石蜡搅拌，再加 10mL灭菌的吐

温 80，在 40℃～44℃水浴中震荡混和 10min，添加灭菌的盐水 75mL（在 40℃～44℃ 沙浴中预温），在 40℃～44℃水浴中乳化，做成 1：10 的悬液。

5.2   膏、霜、溶剂半固态状试品

5.2.1   亲水性的样品：称量 10g，加到配有玻璃弹珠及 90mL灭菌盐水的三角瓶中，充足 震荡搅拌，静放 15min。用其上清液做为 1:10 的检液。

5.2.2   疏水性试品：称量 10g，放到杀菌的研钵中，加 10mL 灭菌液体石蜡，碾磨成浓稠状， 再添加 10mL 杀菌司盘 80，碾磨待溶解后，加 70mL 杀菌生理生理盐水，在 40℃～44℃水浴中 充足混和，做成 1：10 检液。

5.3   固态样品

称量 10g，加到 90mL 杀菌盐水中，充足震荡搅拌，使其分散化混悬，静放后，取上 发酵液做为 1：10 的检液。

若有均质器，以上水溶膏、霜、颗粒剂等，可称  10g  样品添加  90mL杀菌盐水， 匀质 1min～2min；疏水性膏、霜及眉粉、唇膏等，称 10g 样品，加 10mL杀菌液态石蜡，

10mL 司盘 80，70mL 杀菌盐水，匀质 3min～5min。

二、菌数

1   范畴 本规范要求了护肤品中过氧化值的检测方式。 本标准适用护肤品菌数的测量。

2   界定 本规范选用以下界定

菌体总数（Aerobic bacterial count）是指护肤品检样通过解决，在一定情况下塑造后（如 培养液成份、塑造温度、培养時间、pH 值、需氧性质等），1g（1mL）检样中常含菌体的总 数。所得的結果只包含一群本方式要求的前提下成长的嗜常压的需氧性菌数。

测定菌落数量便于断定样品被真菌感染的水平，是对样品开展卫生学期评价的综合依

据。

3   仪器和设备

3.1   三角瓶，250mL。

3.2   容量瓶，200mL。

3.3   pH 计或高精密 pH 试纸。

3.4   髙压灭菌器。

3.5   试管婴儿：15×150mm。

3.6   杀菌平皿：直徑 9cm。

3.7   杀菌刻度塑料吸管，10mL、1mL。

3.8   乙醇灯。

3.9   控温培养箱：36℃±1℃。

3.10   变大镜。

4   培养基和实验试剂

4.1   生理学盐水：见条例中 3.1。

4.2   卵磷脂、司盘 80―营养成分琼脂培养液

琼脂                                        15g

大豆卵磷脂                                      1g 司盘  80              7g 水蒸气蒸馏水                                        1000mL

4.2.2   制作方法：先将卵磷脂加到少量水蒸气蒸馏水中，加温溶解，添加司盘  80，将其他成分（除琼 脂外）加到其他的纯净水中，融解。加入已分解的大豆卵磷脂、司盘 80，搅拌，调 pH 数值 7.1～

7.4，添加琼脂，103.43kPa（121℃ 15 lb）20min 高压灭菌，存储于冷阴暗处预留。

4.3   0.5％氯化三苯四氮唑（2,3,5-triphenyl terazolium chloride，TTC） 成份：TTC      0.5g

*CFU：菌落形成企业。

4.5.2   染色法

4.5.2.1   将涂片在火苗上固定不动，滴入结晶紫上色液，染 1min，水清洗。

4.5.2.2   滴加革兰氏阳性菌碘液，功效 1min，水清洗。

4.5.2.3   滴加 95％乙醇褪色，约 30s，或将乙酸乙酯滴满全部玻片，马上倾去，再用乙酸乙酯滴满整 个玻片，褪色 10s，水洗。

4.5.2.4   滴加复染液，复染 1min，水清洗，待干，镜检查。

4.5.3     染色結果 革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈鲜红色。

注：如用 1:10 稀释液石碳酸复红上色液作复染，复染時间仅需 10s。

5   操作流程

5.1   取 10mL  1：10 稀释的检液，加到 10mL 二倍乳清蛋白胆盐（含还原剂）培养液中，置 44

℃±0.5℃培养箱中塑造 24h～48h，如不产酸都不胀气，则汇报为粪大肠菌群呈阴性。

5.2   如产酸胀气，画线注射到伊红美蓝琼脂平板电脑上，置  36℃±1℃培养  18h～24h。与此同时取 该栽培基质 1～2 滴注射到蛋白胨水里，置 44℃±0.5℃塑造 24h±2h。

经培养后，在以上平板电脑上观查有没有典型性菌落生长发育。粪大肠菌群在伊红美蓝琼脂培养液上 的典型性菌落呈深黑紫色，环形，边缘齐整，表面光洁潮湿，常具备金属光泽。也是有的呈紫黑色 色，不带或有点金属光泽，或浅紫色，中心较深的菌落，亦常为粪大肠菌群，应留意选择。

5.3   挑菌上述异常菌落，玻片作革兰氏染色镜检查。

5.4   在蛋白胨水栽培基质中，添加靛栽培基质实验试剂约  0.5mL，观查靛栽培基质反映。阳性者液位呈玫 瑰鲜红色；阴性反应液位呈实验试剂原色。

6   检验结果汇报 依据发醇乳清蛋白产酸产气，平板电脑上面有典型性菌落，并经确认为革兰呈阴性短链球菌，靛栽培基质试

验呈阳性，则可汇报被检试品中验出粪大肠菌群。

四、铜绿假单胞菌

1   范畴 本规范要求了护肤品中铜绿假单胞菌的检测方式。 本标准适用护肤品中铜绿假单胞菌的检测。

2   界定 本标准选用以下界定。

铜绿假单胞菌（Pseudomonas  aeruginosa）属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，空气氧化 酶呈阳性，能造成绿脓菌素。除此之外还能汽化果胶，复原磷酸盐为硝酸盐，在 42℃±1℃标准 下会生长发育。

该菌对人会有发病力，可使患处溃烂，造成败血病等。

3   仪器设备

3.1   塑造箱：42℃±1℃、36℃±1℃。

3.2   三角瓶，250mL。

3.3   试管婴儿：15×150mm。

3.4   杀菌平皿：直徑 90mm。

3.5   杀菌刻度塑料吸管，10mL、1mL。

3.6   显微镜镜。

3.7   载玻片。

3.8   注射针、接种环。

3.9   电磁感应炉。

3.10   髙压灭菌器。

4   培养基和实验试剂

4.1   SCDLP 液体培养基 见总则中 3.2。

4.2   十六烷基三羟基溴化铵培养液

成份：牛肉膏                                          3g 蛋白胨                 10g 氧化钠                                                 5g 十六甲基三羟基溴化铵                                                  0.3g 琼脂                    20g 水蒸气蒸馏水                                            1000mL

制作方法：除琼脂外，将所述成份混和加温融解，调 pH 为 7.4～7.6，添加琼脂，68.95kPa

（115℃  10 lb）20min 灭菌后，做成平板电脑预留。

4.3   乙酰胺培养液

成份：乙酰胺                                     10.0g 钛酸异丙酯钠      5.0g 没有水磷酸钙氢二钾                                         1.39g

没有水磷酸钙二氢钾                       0.73g 盐酸镁（MgSO4.7H2O）                                                   0.5g 酚红      0.012g 琼脂                                                         20g 水蒸气蒸馏水   1000mL

制作方法：除琼脂和酚红外线，将其他成份加到纯净水中，加温融解，调 pH 为 7.2，添加琼 脂、酚红，103.43kPa（121℃  15 lb）20min 髙压灭菌后，做成平板电脑预留。

4.4   绿脓菌素测量用培养液

成份：蛋清胨                                        20g 钛酸异丙酯镁           1.4g 盐酸钾                                                     10g 琼脂               18g 凡士林（化学纯）                                            10g 水蒸气蒸馏水    1000mL

制作方法：将蛋白胨、氧化镁和硫酸铵加到纯净水中，升温使其融解，调 pH 至 7.4，添加 琼脂和凡士林，加温融解，散装于试管婴儿内，68.95kPa（115℃  10 lb）20min高压灭菌后，做成

斜坡预留。

4.5   果胶培养基

成份：牛羊肉膏                                          3g 蛋清胨                  5g 明胶                                              120g 水蒸气蒸馏水  1000mL

制作方法：取各成份加到纯净水中泡浸 20min，随时随地拌和升温使之融解，调 pH 至 7.4，分装 于试管婴儿内，经 68.95kPa（115℃  10 lb）20min 灭菌后，站立做成高层住宅预留。

4.6   氰化钠盐蛋白胨水培养液

成份：蛋清胨                                        10g 酵母菌浸膏                       3g 氰化钠钾                                          2g 亚硝酸盐钠             0.5g 水蒸气蒸馏水                                        1000mL

制作方法：将蛋白胨和酵母浸膏加到纯净水中，加温使之融解，调 pH 为 7.2，煮沸过虑后 补充水率，添加硝酸钾和亚硝酸钠，融解搅拌，散装到加上小倒管的试管婴儿中，68.95kPa（115

℃  10 lb）20min 杀菌储备用。

4.7   一般琼脂斜坡培养液

成份：蛋清胨                                        10g 牛羊肉膏                3g 钛酸异丙酯钠                                                 5g 琼脂             15g 水蒸气蒸馏水                                           1000mL

制作方法：除琼脂外，将其他成份融解于纯净水中，调 pH 为 7.2～7.4，添加琼脂，加温溶 解，散装试管婴儿，103.43kPa（121℃  10 lb）20min 高压灭菌后，做成斜坡预留。

5   操作流程

5.1   增菌培养：取 1:10 试品封闭液 10mL 加到 90mL  SCDLP 液体培养基中，置 36℃±1℃

 塑造  18h～24h。若有铜绿假单胞菌生长发育，栽培基质表层多有一层薄菌膜，栽培基质常呈浅绿色 或深蓝色。

5.2   分离培养：从培养液的薄膜处挑菌培养物，划线接种在十六烷三羟基溴化铵琼脂平板 上，置 36℃±1℃塑造 18h～24h。凡铜绿假单胞菌在这里培养液上，其菌体平扁无定形，向周 边蔓延或略微扩散，表层潮湿，菌体呈灰白，菌体周边培养液常蔓延有水溶黑色素，此培 养基可选择性强，肠子艾希氏菌不可以生长发育，革兰氏阳性菌生长较弱。

在缺乏十六烷三丙基溴化铵琼脂时也可以用乙酰胺培养液开展分离出来，将菌液画线注射于平 板上，放 36℃±1℃塑造 24h±2h，铜绿假单胞菌在此培养基上生长优良，菌落平扁，边沿 不齐，菌落周边培养基略带淡粉色，其他菌不生长。

5.3   染色镜检：挑取可疑的菌落，玻片，革兰氏染色，镜检为革兰氏呈阴性者应进行氧化酶 实验。

5.4   氧化酶试验：取一一小块洁净的乳白色滤纸片放到灭菌平皿内，用无菌玻璃棒挑取铜绿假 单胞菌异常菌落涂在过滤纸上面，随后在其上滴入一滴新配置的 1％二甲基对苯二胺标准溶液，在

15s～30s 之内，发生粉色或暗紫色时，为氧化酶实验呈阳性；若塑造物不掉色，为空气氧化酶试 验呈阴性。

5.5   绿脓菌素实验：取异常菌落 2 个～3 个，各自注射在绿脓菌素测量培养基上，置 36℃

±1℃塑造  24h±2h，加入乙醚  3mL～5mL，充足震荡使塑造物中的绿脓菌素融解于乙醚液 内，待氯仿萃取液呈深蓝色时，用塑料吸管将乙醚移到另一试管婴儿中并添加 1mol/L 的硫酸 1mL 上下， 振荡后，静置一会儿。如顶层盐酸液内发生粉色色到紫红色时为阳性，表明被检物中有绿脓 菌素存有。

5.6   硝磷酸盐复原产气试验：挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物，接种在硝酸盐胨水养养基 中，置 36℃±1℃塑造 24h±2h，观察結果。凡在磷酸盐胨水培养液内的小倒管内有汽体者， 即是呈阳性，说明该菌能复原磷酸盐，并将硝酸盐溶解造成氢气。

5.7   明黏剂化试验，取铜绿假单胞菌可疑菌落的纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置

36℃±1℃培养 24h±2h，取下放电冰箱 10min～30min，如仍呈融解状或表层融解时即是果胶 汽化实验呈阳性；如凝结不溶者为呈阴性。

5.8  42℃生长试验：挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物，注射在普通琼脂斜面培养基上， 放到 42℃±1℃培养箱中，塑造 24h～48h，铜绿假单胞菌能生长，为呈阳性，而类似的莹光假 单胞菌则不可以生长。

6   检验结果汇报 被检样品经增菌分离出来培育后，经确认为革兰呈阴性链球菌，氧化酶及绿脓菌素实验皆为阳

性者，就可以汇报被检试品中验出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素实验呈阴性而汽化果胶、磷酸盐还 原产地气和 42℃生长实验三者皆为呈阳性时，仍可汇报被检试品中验出铜绿假单胞菌。

五、橙黄色金黄葡萄球菌

1   范畴 本规范要求了护肤品中金黄色金色葡萄球菌的检测方式。 本标准适用护肤品中橙黄色葡萄球菌感染的检测。

2   界定 本标准选用以下界定

金黄色色红提球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏呈阳性革兰阴性杆菌，呈红提状排序，无芽胞， 无荚膜，能溶解甘油果糖，血液凝结酶呈阳性。

该菌是金黄葡萄球菌中对人们发病力最強的一种，能造成身体部分病毒性疾病，比较严重时可微 致败血病。

3   仪器和设备

3.1   显微镜镜。

3.2   控温培养箱：36℃±1℃。

3.3   离心式机。

3.4   杀菌吸管，1mL、10mL。

3.5   杀菌试管：15×150mm。

3.6   载玻片。

3.7   乙醇灯。

4   培养基和实验试剂

4.1   SCDLP  液体培养基 见总则中 3.2。

4.2   7.5％的氧化钠骨头汤

成份：蛋清胨                                  10g 牛羊肉膏           3g 钛酸异丙酯钠                                               75g

纯净水加至                         1000mL

制作方法：将所述成份加温融解，调 pH 为 7.4，散装，103.43kPa（121℃  15  lb）15min 高 压杀菌。

4.3   Baird Parker 平板电脑

成份：胰蛋清胨                                   10g 牛羊肉膏      5g 酵母菌浸膏        1g 甲苯酸钠                              10g 甘氨酸    12g 氯化锂（LiCl?6H2O）                            5g

0.5mL，分别添加杀菌 1:4 血液 0.5mL，搅拌，做为对比。

6   检验结果汇报 凡在上述挑选平板电脑上面有异常菌体生长发育，经上色镜检查，证实为革兰氏阳性金黄葡萄球菌，并能发醇甘油果糖产酸，血液凝结酶实验阳性者，可汇报被检试品验出橙黄色金黄葡萄球菌。

六、黄曲霉菌和酵母

1   范畴 本规范要求了护肤品中黄曲霉菌和酵母数的检验方式。 本标准适用各种各样护肤品中黄曲霉菌和酵母的记数。

2   界定 本标准选用以下界定。

黄曲霉菌和酵母数测定（Determination of molds and yeast count）就是指化妆品检员样在一定条 件下塑造后，1g 或 1mL 护肤品中所环境污染的活的黄曲霉菌和酵母总数，藉以断定护肤品被黄曲霉菌 和酵母环境污染水平以及一般卫生条件。

己方法依据黄曲霉菌和酵母特有的状态和塑造特点，在虎红培养液上，置 28℃±2℃塑造72h，计算机所生长发育的黄曲霉菌和酵母数。

3   仪器和设备

3.1   塑造箱：28℃±2℃。

3.2   震荡器。

3.3   天平秤。

3.4   三角瓶，250mL。

3.5   试管婴儿：15×150mm。

3.6   培养皿：直徑 9cm。

3.7   塑料吸管，1mL、10mL。

3.8   容量瓶，200mL。

3.9   乙醇灯。

3.10   髙压灭菌器。

4   培养基和实验试剂

4.1   生理学盐水 见条例中 3.1。

4.2   虎红（孟加拉国红）培养液

成份：蛋白胨                                          5g 葡萄糖水          10g 磷酸二氢钾                                                 1g 盐酸镁（含 7H2O）     0.5g 琼脂                                            20g

1/3000 虎红溶液                    100mL

（四氯四碘荧光素）

水蒸气蒸馏水                                 1000mL

氯霉素                                   100mg

制作方法：将上述各成份（除虎红外线）添加水蒸气蒸馏水中融解后，再添加虎红饱和溶液。分装后，103.43kPa（121℃  15 lb）20min  高压灭菌，另用少许乙酸乙酯融解氯霉素，过虑融解后添加培养基中，如果没有氯霉素，应用时每 1000mL 加氨苄青霉素 30mg。

5   操作流程

5.1   试品稀释 见菌落总数测定中 6.1。

5.2   取  1：10、1：100、1：1000  的检液各  1mL  各自引入杀菌培养皿内，每一个稀释液度各用  2

个培养皿，引入溶化并冷至 45℃±1℃上下的虎红培养液，充足混匀。凝结后，旋转平板电脑，置

28℃±1℃培养  72h±2h，记数平板电脑内生长发育的霉菌和酵母菌数。若有霉菌扩散生长发育，为防止 危害其他黄曲霉菌和酵母的记数时，于 48h±2h 应立即将此平板电脑取下记数。

5.3   计算方法：先点数每一个平板上生长发育的霉菌和酵母菌菌落数，求出每一个稀释度的平均菌 落数。判断結果时，应选择菌体数在 5 个～50 个范围内的培养皿记数，乘于稀释倍数后， 即是每 g（或每 mL）检样中常含的黄曲霉菌和酵母数。其他区域内的菌体数汇报应参考菌体 数量的汇报方式汇报之。

5.4   每 g（或每 mL）化妆品含霉菌和酵母菌数以 CFU/g（mL）表明。