无尘室棚沉降菌测试规范安全操作规程

1、菌落：细菌检查后，由一个或好多个细菌繁殖而产生的一病菌集落，通称CFU。通常用数量表明。

2、测试方式：地基沉降法，即利用当然地基沉降基本原理搜集在空气中的微生物物体于培养基培养皿，经48个小时以上塑造，在适合的标准下让其繁衍到可以看到的菌落数，来鉴定清洁自然环境内的活微生物菌种数，并借此来鉴定无尘室棚的洁净度等级。

3、常用的仪器设备和机器设备

1）髙压消毒锅：应用时参考文档GZ-ZL-SOP-066-00开展实际操作。

2）恒温培养箱：务必按时对培养箱的温度表开展计量检定。

3）培养皿：一般选用中90mm×15mm硼氯化镁夹层玻璃培养皿。应用前将培养皿放置121℃湿热灭菌20分鐘。

4、培养基：一般营养成分琼脂培养基。将培养基加温融化，制冷至约45℃在无菌技术前提下将培养基引入培养皿，每皿约15m1。待琼脂培养基凝结后，将培养基培养皿放进30～35℃恒温培养箱中塑造数钟头，若培养基培养皿上确实没有菌落生长发育，就可以供取样用，制取好的培养基培养皿应在2～8℃的条件中储放。

5、测试流程

1）取样方式：将已制取好的培养皿置放在预先确定的抽样点，开启培养皿盖，使培养基表层曝露0.5钟头，再将培养皿盖紧盖后颠倒。
2）塑造，時间不少于48钟头。每次培养基应该有对比实验，查验培养基自身是不是环境污染，可每次选中3只培养皿作对比塑造。

3）菌落记数：用人眼立即记数，随后用5～10倍高倍放大镜查验，有无忽略。若培养皿上面有2个或2个以上菌落重合，可辨别时仍以2个或2个以上的菌落记数。

6、常见问题

1）测试用品要做杀菌解决，以保证测试的稳定性、准确性。

2）采用一切对策避免 人为因素对样版的环境污染。

3）对培养基、塑造标准以及他主要参数作详尽的纪录。

4）因为病菌品种繁多，区别甚大，记数时一般用电子散射光于培养皿反面或正脸认真观察，不必漏计培养皿边沿生长发育的菌落，并须留意病菌菌落与培养基沉淀的棚别，必需时要高倍显微镜辨别。

5）取样前要认真仔细每一个培养皿的品质，如发觉质变、损坏或环境污染的应去除。

7、测试标准

1）测试情况

（1）沉降菌测试前：被测试无尘室棚（棚）的温湿度记录须做到要求的规定，负压差、务必操纵在标准值内。被测试无尘室棚（棚）已消毒。

（2）测试情况有静止和信息二种，并在汇报中标明测试情况。

（3）测试工作人员：测试人员务必配戴合乎自然环境洁净度等级等级的工作服装。静态数据测试时，棚里测试工作人员不可超过2本人。

2）测试時间

（1）对单边流，如100级净化处理棚间内及层.流操作台，测试应在空调净化系统软件正常的运作不少于10分鐘后逐渐。

（2）对非单方面流，如10000级、100000级以上的净化处理棚间，测试应在空调净化系统软件正常的运作不少于30分鐘逐渐。

8沉降菌记数
1）至少取样点数量：可按表1明确。在达到至少测等级的与此同时，还宜达到至少培养皿数，见表2。  表1最少取样点数量

总面积(m2)	洁净度等级等级
	100	10000	100000	300000
＜10	2～3	2	2	2
≥10～＜20	4	2	2	2
≥20～＜40	8	2	2	2
≥40～＜100	16	4	2	2
≥100～＜200	40	10	3	3

注：表格中的总面积针对单边流无尘室棚就是指排风总面积，针对非单方面流无尘室棚就是指棚间总面积。         表2至少培养皿数

洁净度等级等级	所需Φ90mm培养皿数（以地基沉降0.5钟头计）
100	14
10000	2
100000	2
300000	2

2）取样点的布局：工作中棚测试点部位距地0.8～1.5m上下（稍高于工作台面）。可在主要设备或重要工作中主题活动范畴处提升测量点，取样点的安排应务求匀称，防止取样点在某 部分棚域过度集中化，某部分棚域过度稀少。

3）纪录：测试汇报中应纪录棚间溫度、空气湿度、压力差、测试情况及测试数据信息。

4）結果测算：用记数方式得到每个培养皿的菌落数。均值菌落数的测算见上式：m1 m2 …… mn

均值菌落数m=n

式中：m为平均菌落数；m1为1号培养皿菌落数；m2为2号培养皿菌落数；mn为n号培养皿菌落数；n为培养皿数量。

5）結果鉴定：用均值菌落数分辨无尘室棚的空气中的微生物菌种。

6）无尘室棚（棚）内的均值菌落数务必小于所选中的标准（见表3）。                    表3

清洁等级	100级	10000级	100000级	300000级
规范（均值）	1个/皿	3个/皿	10个/皿	15个/皿

7）若某无尘室棚（棚）的均值菌落数超出标准，则务必对于此事棚域优先消毒杀菌，随后再次测试2次，测试結果务必达标。

关键论文参考文献：国家行业标准GB/T 16294-1996