什么是细胞棚，细胞棚管理及设置规范

细胞棚一般便是负责单抗、HIV、体细胞等医治中药制剂和诊断试剂、生产制造用细胞及牛血清等检测的专用型试验棚；并包含负责相对应种类国家药品标准、一类药物和进口药品规范的技术性审批、核查、修定或拟定等；负责相对应种类国家国家标准物质的研发、校准和派发；进行相对应技术性方式科学研究及专业技术人员学习培训。

病理科细胞棚关键服務于临床医学，为临床医生给予立即而确切的细胞学查验結果，它根据微创或微创手术的方法，既缓解患者查验时的痛楚又可以得到立即客观性的結果。

 

一细胞棚如何设置

1)       基本细胞棚的设定和设备

1.        无菌技术细胞棚：

1)       由更衣室,缓冲间和操作室三部份构成

2)       更衣室：坐落于塑造棚最外界，用以拆换清洁的衣帽鞋防护口罩。置放消毒杀菌的防护衣、衣帽柜、鞋架。

3)       缓冲间：坐落于更衣室与操作室中间，目地是为了确保操作室的无菌检测自然环境。置放家用冰箱、石蜡灌、消毒杀菌好的灭菌物件等。

4)       操作室：坐落于内部结构，专用型于无菌技术、细胞塑造。置放超净工作台及二氧化碳培养箱,离心脱水机,倒置显微镜等。

棚间规定：单独棚间，按洁净棚规定修建，并必须维持室内消毒和清理无尘室：

1)       紫外线灭菌灯―造成活性氧，而且棚里溫度及环境湿度均较高，不利工作员身心健康。

2)       空气净化的恒温恒湿设备设备―－最好是，气体洁净度等级等级如下所示：

洁净度等级等级	细颗粒物较大容许数／立方	微生物菌种较大容许数	浮游菌／立方	沉降菌／皿
100级	3500	0	5	1
10000级	350,000	2,000	100	3
100000级	3,500,000	20,000	500	10
300000级	10，500，000	60,000	1000	15

注：气体洁净度等级等级表：一般一般塑造棚常采用100000级的

2.        提前准备棚：常设定在无菌技术细胞棚外界，关键开展栽培基质及相关塑造用的液态等的制取。关键设定：离心脱水机、恒温水浴锅、按时时钟、一般天平秤及日常剖析解决物

3.        刷洗消毒间：要和别的棚域分离，最好是单独一棚，适用于各种各样塑造容器的清理、提前准备和消毒杀菌，常设定：烘干箱、髙压蒸汽消毒锅、去离子水或是纯净水CPU、酸缸、不锈钢水槽软毛刷等。

二．细胞棚常见的基本上机器设备

1.仪器设备：

1)       净化工作台－常见侧流式的（竖直流）操作台，洁净度等级应做到100级。中国商品一般都能够合格。视场角地尺寸采用一个较宽的或是好几个较小的，如：北京市嘉创博远生产制造的VC-S-1040

2)       高倍显微镜：颠倒光学显微镜，若有标准，还行配备含有拍照系统软件的高品质相差显微镜、解剖学高倍显微镜、录影系统软件或缩时影视拍摄设备等，便于随时随地观查、纪录、拍摄细胞生长发育状况。需海外不错商品，如：Olympus

3)       CO2培养箱：需国外产品，如：SANYO/三洋

4)       烘干箱：电热干燥箱提温较高，一般需做到160℃以上。中国商品可合格

5)       水提纯设备：造成去离子水，可以用三蒸水取代。国外产品如：MillQ

6)       电冰箱：低温冰箱（-20℃）可选中国的、超低温冰箱（-70,80C,）必须国外产品

7)       液氮罐：中国商品可

8)       离心脱水机：中国商品可，低速离心机就可以，不用超低温冷藏。用以细胞地基沉降，快速不太好。

9)       精密电子天平：国内就可以，需做到精度：电子分析天平的感量为0.1mg、0.01mg和0.001mg。

10)    消毒机：髙压蒸汽消毒锅，国内

11)    过滤装置：用以过虑培养液，国内進口都可以

2.常见的塑造容器：

1)       塑造瓶：由夹层玻璃或塑胶做成。适用于塑造、繁育细胞。开展塑造时培养瓶瓶塞加盖螺旋式瓶塞或橡胶塞子，胶塞多用以密封性塑造。国内塑造瓶的尺寸以容积（ml）表明，如250ml、100ml、25ml等；進口塑造瓶则多以底面积（cm2）表明。

2)       细胞培养皿：由夹层玻璃或塑胶做成，供盛取、分离出来、解决机构或做细胞毒副作用、集落产生、单细胞分离出来、放射性核素掺加、细胞繁育等试验应用。常见的细胞培养皿规格型号有10cm、9cm、6cm、3.5cm等。

3)       多孔结构塑造板：为塑胶制品。可供细胞复制及细胞毒副作用等各种各样检验试验应用。其特点是节省样版及实验试剂，可一起检测很多样版，便于开展无菌技术。塑造板分成各种规格型号，常见的规格型号有：96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。

4)       塑造实际操作相关的容器：

a)        贮液瓶：适用于储放或配置各种各样塑造用液态如栽培基质、血清蛋白及实验试剂等。贮液瓶分成多种差异规格型号，如1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、5ml等。

b)       塑料吸管：关键分成标尺塑料吸管、无标尺塑料吸管。标尺塑料吸管适用于汲取、迁移液态，常见的有1ml、2ml、5ml、10ml等规格型号。无标尺塑料吸管分成直头塑料吸管及弯管塑料吸管，除可以作汲取、迁移液态外，弯管尖塑料吸管还常见于吹打、搅拌及传代培养细胞。

c)        加样器（移液器）：用以汲取、挪动液态或滴入样版。可按照需求调整量的尺寸，吸量精确、便捷。尤以少量加样器，可确保试验试品（或实验试剂）成分精准，可重复性优良。现阶段，可高温消毒的，多路的各种移液器可储存者挑选，能保证加样精确、迅速、便捷而且做到无菌检测规定。

d)       别的用具：还有搜集细胞用的离心管架，置放实验试剂或临时性插置塑料吸管用的试管婴儿，装放塑料吸管便于消毒杀菌的钢化玻璃或不锈钢储罐，用以储放小物件培养物件有利于髙压杀菌的铝质便当盒或储槽，套于塑料吸管顶端的塑胶吸尘器，封闭式各种各样瓶、管的橡胶塞子、外盖、冻存细胞用的安瓿或冻存管、不一样尺寸的注射针、量杯和容量瓶及其布氏漏斗，净化工作台应用的酒精喷灯，供实验人员操作之前消毒杀菌手应用的盛满乙醇或别的消毒剂的小型喷水壶等。

三 细胞棚管理方法管理制度

细胞棚是开展各种各样细胞塑造的净化处理级实验棚，全部进到实验棚的人员都需要遵循实验棚相关的管理制度，接纳实验棚管理方法人员的管理。

第一章 条例

第一条 细胞棚关键由团体内有关科学研究人员应用，正常情况下不扩大开放，别的人员如的确需应用细胞棚务必事先征求实验棚负责人和细胞棚负责人允许。

第二条 出入细胞棚实验必须严苛备案。若有不符实验棚工作中和生物安全规定的，实验棚负责人和细胞棚工作中人员有权利勒令整顿。

第三条 应用人员需参与专业的细胞棚应用标准学习培训并通过培训后，即可批准进到细胞棚开展实验。禁止未经同意许可私自进到细胞棚或应用有关机器设备。

第四条 细胞棚正常的应用全过程中，人员出入应根据缓冲间和风淋室间；出入实验棚的仪器和试品需根据传递窗，禁止随身携带带入。实验用具应尽可能一次带入，禁止将与实验不相干的物件带入实验棚，在细胞棚里不可开展微生物菌种等其他易污染物质的塑造，严禁从业一切高风险生物化学实验。

第五条 实验人员应爱惜实验棚各种仪器设备，依照标准应用并维持设施清理。实验中的价格昂贵机器设备，未经同意许可不能私自电源开关。仪器仪表须经专业学习培训后才能实际操作未经同意许可不可更改设备仪器的预置主要参数。设备仪器出现异常或产生安全事故，应立即向实验棚负责人汇报，分配技术专业人员开展维修。

第二章 规章

第一条 基本实际操作

1. 衣着专用型实验服。实验人员务必在细胞棚缓冲间内拆换细胞棚专用型实验服，禁止不穿实验服或立即衣着一般实验棚实验服进到细胞棚。

2. 衣着专用型凉拖。在提前准备间换下来自身的鞋，尽量减少在缓冲间行走、滞留。

3. 细胞棚较多可6本人一起应用。

4. 实验全过程中禁止喧闹，闲谈，不断出入细胞棚。

第二条 培养箱应用标准

1. 从培养箱拿取物件前，用乙醇清理两手（或胶手套），尽可能减少开门时间和降低打开门频次。
　注： 培养箱中的气体是通过过虑的清洁气体。长期打开或经常电源开关培养箱，非常容易导致环境污染。

2.从培养箱取放细胞时轻拿小心轻放，手疾眼快，顺手关严培养箱门。没经容许，严禁翻阅、挪动别人细胞或试品，若有特别必须的，请联络实验棚负责人融洽。

3. 塑造瓶皿放进培养箱前，用医用酒精消毒表层，并稍等片刻至酒精挥发后再放进，以防塑造箱里停留太多乙酸乙酯蒸汽。
4. 塑造箱里细胞塑造的置放需干净整洁井然有序，便捷搜索，与此同时应尽可能提升培养箱的运用高效率，承担教师可视性实验状况开启或终止空培养箱的应用，节约能源。
5. 一般塑造中的细胞，既非实验独特必须，一瓶/板细胞每日只必须观查生长发育情况一次，2人以上同用的细胞，可约好時间一起观查。
　注：经常将细胞取出观查，非常容易给培养箱导致环境污染，与此同时也会危害细胞生长发育情况的稳定。

6.原代细胞需置放在原代培养专用型培养箱塑造，不可置放于别的培养箱，如一段时间内无原代细胞实验，负责人可融洽分配培养箱供别的细胞塑造应用。

7.实验人员应时常留意查验培养箱溫度、CO2汽体量是不是相符合额定值。密切关注塑造箱里的加湿盘，按时拆换无菌水并做好消毒杀菌。密切关注塑造箱里状况，如发生发霉、牙斑菌、衣原体和支原体感染或别的显著染菌征兆，应该马上通告管理人员以及它使用人。

第三条 显微镜使用标准

1. 颠倒相差显微镜应用前，用酒精棉从正中间至周边擦洗测角仪。
2. 离去细胞棚时或长时间不需采用时，立即合上开关电源，增加电灯泡使用寿命。尽量减少经常电源开关高倍显微镜开关电源。

3.一次细胞实验应用结束后，在显微镜使用记录册上备案。

4.光学显微镜归属于珍贵仪器设备需遵循珍贵仪器设备预定应用技术规范。

第四条 洁净台有关实际操作标准

1. 洁净台应用遵循预定标准。在细胞棚入口预定，细胞棚里填好应用备案。

a：无预定者若必须在别人预定时间段内应用，先要征求预定者的允许，不然应没有理由交出操作台，以防耽搁别人实验。

b：应用油性记号笔在预定报表上提早预定下一周的使用时间，一定要注意周六周日就是指上星期的礼拜天。

c：预定內容请包含：时间段，名字，如独特实验请注明。

2. 洁净台应用前要紫外线杀菌灯直射15分鐘杀菌，应用前、后要用酒精棉球擦洗工作中棚消毒杀菌，全部物件放进洁净台内应用前均应消毒杀菌，洁净台内禁止堆积太多物件危害风路均衡，不一样洁净台内物件禁止经常互换应用。

3. 引燃酒精喷灯前需查验瓶中乙醇是不是充足，液位应占瓶高1/3-2/3。
　注： 消毒杀菌用75%的乙醇，酒精喷灯用95%以上的乙醇，向喷水壶或灯内加上乙醇时请注意。

4. 洁净台中应放置废水杯，用以临时储放废料，实验完毕后将杯里添加NaOH饱和溶液解决一会儿，废水废弃物倒进蓄水池并与此同时自来水冲释，固态废弃物倒进微生物试品专用型垃圾箱中
　注： 废水缸应妥善处理，禁止长期置放，以防留出很多栽培基质滋长病菌。

5.细胞实验后一切带有细胞塑造废弃物的塑造瓶，离心管架，容量瓶等务必立即带出细胞棚。

第五条 器材的清理标准

1. 可回收利用的容量瓶、离心管架、塑造瓶皿等，放进配有冷水的塑料罐中泡浸，桶刚需有一定量的冷水以未过泡浸物件。
　注： 可回收利用容器必需时先基本洗刷后再放进桶内，尤其是塑造瓶或血清蛋白管内有很多高营养成分的液态残余时，非常容易使桶内的冷水长菌。确保泡浸的瓶、管中彻底被冷水充斥着，而不是在配有很多气体的情形下被碾过桶底。　　

2. 冷水清洗后立即放进酸缸泡浸，应由操作者自己立即清理晾晒预留，实际操作时一定要注意带胶皮手套，当心实际操作。
　注： 严禁长期泡浸于冷水中，这时病菌很有可能已在桶中成长并释放出来类毒素。细菌内毒素难以利用基本湿热灭菌流程除去整洁，即使干烤也无法保障其彻底失去活性。类毒素对细胞生长发育及多种多样实验均有很大危害。

清洗程序流程：冷水冲十次以上除去重金属超标残余，随后冲去离子水5次，再用超纯水系统5次，倒放置烘干箱中晾晒。并立即捆扎杀菌。

第六条 电冰箱、实验试剂等有关实际操作标准

1. 从电冰箱拿取物件姿势要快速，闭店时要查验门是不是关好。按类型储放实验试剂。禁止长期打开电冰箱门。
2. 每个人储放于电冰箱内的栽培基质、生化试剂、试品要标明名字、配置日期、试品名字，独特实验试剂需得到细胞棚管理方法人员允许之后才能置放。不可应用其他人的栽培基质或别的生化试剂。

3. 散装好的血清蛋白长期储存于-80℃，应用前放在4℃预解除冻结。正常情况下解除冻结好的血清蛋白应所有配出含血清蛋白的培养液预留，若有剩下，则储存于4℃并尽早应用。最好不要应用别人开了的血清蛋白，以防交叉式环境污染。

4.细胞棚里的冰柜空間比较有限，尽可能仅置放应用次数较高的实验试剂。切勿将一些闲置不用实验试剂，环境污染实验试剂长期性置放在细胞棚。

5.工作中人员会按时对电冰箱开展清除，发觉无标识，到期实验试剂等违法物件将全部清除出来，而且搜索实验试剂配备人给与警示。

第七条 进到细胞棚物件操纵

1. 全部进到细胞棚的物件需通过传递窗，尽可能通过紫外光直射，乙醇表层消毒杀菌。

2. 禁止将很有可能带有污染物质或病菌的实验物件带入细胞棚。

3. 细胞棚里仅置放少许实验务必耗品就可以，不可成箱住入，发生洁净棚内物件沉积情况。

4. 细胞棚里存物柜的物件置放由有关管理方法人员分配，并做标识。

第八条 细胞棚清理准则

1.  每星期值日生時间从周六逐渐，至下周五完毕。
2. 日常维护保养：留意培养箱表明正常的，高倍显微镜，电冰箱，洁净台的常规应用与维护保养。细胞棚里及其大门口微生物试品专用型垃圾箱的立即清除。

3. 每星期大清理：每周五中午五点用新洁尔灭清扫细胞棚。

清理次序：擦洁净台（用酒精棉球）；用新洁尔灭擦桌面上，培养箱，洁净台及其电冰箱表面，及桌子的仪器设备，细胞棚墙壁，传递窗，风淋室棚；给恒温水浴锅放水或鱼缸换水，细胞棚衣橱和凉拖放置齐整，拖地板，紫外光消毒杀菌细胞棚30分鐘。

注：若上星期值日生立即给塑造箱里不锈钢水槽加满水，依据工作经验将来一周内培养箱不容易干水，但值日生仍应时常查验，便于及时处理异常现象。谨记给培养箱加杀菌水。
4. 在沒有发生问题的情形下，每2个月清理一次培养箱：先将培养箱中的东西取下储存于洁净台内，针对特别敏感的细胞可以储存于另一个培养箱；将塑造箱里的不锈钢板材取下，包含4块横版和上下2块立着的铁架子，用酒精棉球清理厚钢板和培养箱内腔；运行培养箱自消程序流程。

第九条 人员学习培训

1.由即将做细胞实验的人员提交申请，填好细胞棚应用申请表格。

2.细胞棚承担教师视申请办理总数酌情考虑分配学习培训時间，培训计划包含安全教育培训、基础知识与实践活动实际操作学习培训。

3.培训考核达标后由老师、培训老师、细胞棚负责人签名确定授于其细胞棚应用管理权限。

4.学习培训不及格再次参与学习培训。

第十条 规章制度的执行与惩罚

1.细胞棚负责人及其管理方法人员密切关注细胞棚的运用状况，发觉违背规章制度作业者最先给与提示，但须做纪录。

2.针对一周内违背3次之内者给予警示，3-5次者给与终止细胞棚应用管理权限2周，超出5次者停止使用其对细胞棚应用管理权限，需再次参与学习培训后能够再度应用。

第三章 附录

本管理制度从发布之日起逐渐实行，由生物医学工程精英团队实验棚管理委员会承担表述及更改。本实验棚追求完美不断发展，诸位教师及应用工作人员若有优良的提议可与细胞棚责任人或实验棚管理委员会组员沟通交流，大家会立即融洽，致力于为精英团队给予和睦，高效率的实验标准。

细胞棚应用申请表格

序号：

申请者：		性別：		职位：老师/学员			技术职称/班级：
老师：		联系方式：				Email：
实验 內容	□原代培养 □ 传代培养培养 □ 正常体细胞培养 □恶性肿瘤细胞培养 □干细胞培养 复制培养 □细胞毒性实验 □细胞结合 □细胞转染 □别的＿＿＿＿＿＿＿＿
应用时 间	年  月 日 ―  年   月 日		出 入 频 率		□每天一次   □每日2次 □一周两次   □一周三次
学习培训安 排	□  必须     □  不用		申 请 培 训 时 间		年  月    日 ―             年   月 日
申请者签名	自己服务承诺：将严格执行细胞棚管理方法管理制度，听从管理方法；若有违背，愿接纳有关惩罚。 签字：                                     年   月    日
老师意 见及学习培训后确定	（请对学员能不能申请办理学习培训给予确定） 签名： 年    月   日			（请服务承诺对大学生应用细胞棚全过程中的标准实际操作给予催促） 签名： 年    月   日
培训老师建议	（请对学员能不能做到标准应用细胞棚给予点评） 签名：                                     年    月   日
细胞棚责任人意 见	（如允许应用，请填好对使用人的规定与义务；如不同意应用，请注明实际原因。） 签名：                                          年     月    日
备注名称

注：此表一式3份，细胞实验棚责任人一份，老师和自己一份，实验棚联合会归档一份。